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Bioss講堂|HE染色疑難解答
發表者:北京博奧森生物      發表時間:2018-12-10

本期導讀:HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。一張質量上乘的HE切片是病理醫生得以做出正確診斷的關鍵。影響HE染色質量的因素是多方面的。本文主要對HE染色中常見的幾個問題及其對策進行分析討論。


蘇木精——伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。


HE染色過程:

?將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數分鐘。

?酸水及氨水中分色,各數秒鐘。

?流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。

?入70%和90%酒精中脫水各10分鐘。

?入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。

?染色后的切片經純酒精脫水,再經二甲苯使切片透明。

?將已透明的切片滴上加拿大樹膠,蓋上蓋玻片封固。


HE染色常見的問題及解決方法

問題1  切片呈霧狀/發灰/發白,核染色模糊

原因:①待封還潮;②蘇木素過氧化老化,冰醋酸揮發;③脫水,透明劑不良,雜質過多;

解決方法:空氣除濕;②蘇木素過濾后加入冰醋酸(促染劑);③常規更換酒精,二甲苯。


問題2  染色不均

原因:固定不充分;②高濃度酒精脫水時間過長;③浸蠟不佳;④染色時間掌握不好;

解決方法:①定期更換染色液;②用2%鐵明礬處理;③浸蠟溫度高于熔點2℃左右;④蘇木素染色鏡下控制。

問題3  細胞成分藍色,如粘液,膠原蛋白或平滑肌

原因:①蘇木素溶液過染;②分化不充分;③蘇木素溶液的PH值>3;

解決方法:①縮短染色時間;②用1%鹽酸酒精分化2-5s,洗脫過染胞核,不應著色的組織成分;③用乙酸調節蘇木素PH值為2.5;④提高酸性酒精的濃度。

問題4  細胞核染色太淺
原因:①蘇木素溶液過老化;②分化時間過長;③蘇木素溶液染色時間短;④固定處理不良,組織不易染色;解決方法:①過濾后100ml蘇木素+1ml冰醋酸,或更換新鮮蘇木素溶液;②減少分化時間或稀釋分化液;③延長蘇木素染色時間;④高濃度酒精固定時間過長,染不上色,用2%鐵明礬處理。

問題5  胞質染色太深

原因:①切片在伊紅溶液中時間過長;②伊紅染色后分化不足;③伊紅染液可能過濃;

解決方法:①減少伊紅溶液染色時間,稀釋伊紅染液;②85%酒精增加分化時間。

問題6  胞質染色太淡

原因:①伊紅染液使用時間太久;②伊紅染液的PH值>4.5,乙醇脫水易褪色;③伊紅染液后酒精沖洗不正確;④伊紅染色時間太短;

解決方法:①更換新鮮的伊紅染液;②用濃醋酸調節伊紅染液PH值(4~4.5),伊紅PH值<3.6,核發紫,對比不強;伊紅染液PH值>5,染不上;③減少伊紅步驟后酒精沖洗的時間;④增加伊紅溶液的染色時間。

問題7  細胞核發紅棕色

原因:①蘇木素染色液氧化過度;②返藍不足;

解決方法:①及時更換然染液;②返藍可用流水、溫水或稀氨水、0.2%碳酸氫鈉等。


舉栗


Ⅰ 正常染色(細胞核呈藍色,細胞漿呈玫紅色,顏色分明)(腎)


Ⅱ 細胞成分藍色(胎盤)


Ⅲ 切片呈霧狀/發灰/發白,核染色模糊(胎盤)


Ⅳ 胞質染色太深(肝)


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